流式细胞分析软件FlowJo

FlowJo是一款专业的流式的细胞分析系统，这款平台是流式的行业最受强烈推荐的一款技术专业分析系统，合适医学类专业的学员应用。手机软件可以协助消费者轻轻松松掌握掌握细胞的情况转变, 有着流动性室和流液推动系统软件，光电转换器和数据处理系统等优秀的科技进步。

手机软件特点：

1.单标样本

单标识样本数据信息常见的动态显示是单主要参数条形图。一般横坐标轴可以是线形平均误差或多数平均误差，意味着着所检验的莹光或透射光的强度；纵轴表明的是横坐标轴某一特殊莹光抗压强度的细胞数，有时候也用相对性百分数来主要表现。

以3 color comp 文件夹名称中的CyPE comp.fcs开展剖析演试。将此文件夹名称挪到桌面上，并把该数据信息文件夹名称从桌面上拖进Flowjo中的组室内空间中。

在组室内空间中点击选定“3 color comp”组，这时在样本室内空间里表明“3 color comp”组里的全部样本。然后在样本室内空间中双击鼠标“Cy5PE comp.fcs”，发生图型对话框。

此为二维点图，X轴选择SSC（侧面透射，细胞内颗粒物构造越繁杂，品质越大，SSC越大，相反越小。）Y轴选择FSC（前向透射，细胞越大，FSC越大；相反越小。）

选择设门专用工具（矩形框门、椭圆形门、不规则图形门、感应门）中的随意一个，在二维点图中选定淋巴结细胞。

在图型对话框中双击鼠标选定的淋巴结细胞，转化成新的图型对话框。在X轴选择Cy5PE:CD4，Y轴选择Histogram，选择设门专用工具（地区门、双分门）中随意一个，在单主要参数条形图中设门。

2.多色标卡样本

多色标识样本，包括双标识、三标识及上面的样本。横坐标轴和纵轴各自意味着与细胞相关的2个单独主要参数，平面图上的每一个点表明具备相对应平面坐标的细胞。

以三标识样本为例子，选择3-color-experiment文件夹名称中的931115-B02-Sample01.FCS开展剖析演试。一样，在在样本室内空间中双击鼠标“931115-B02-Sample01.FCS”样本，发生图型对话框，表明为二维点图。X轴选择FSC，Y轴选择SSC。随后选择不规则图形设门专用工具，在二维点图中选定淋巴结细胞。

双击鼠标淋巴结细胞门，发生图型对话框，X轴选择Fluor::CD3，Y轴选择FSC。应用矩形框设门专用工具选定CD3呈阳性细胞，设门并取名为T细胞。

双击鼠标T细胞门，发生图型对话框，在X轴选择Cy5PE::CD4，Y轴选择PhyEry::CD8，应用十字门专用工具设门（拖拽电脑鼠标将四分门挪到总体目标部位就可以，一般依据细胞分群的发展趋势，四分门的定义线可建在呈阴性、呈阳性细胞的分群处），如下图所显示：

Q1：CD8单呈阳性细胞，为CD8 T细胞

Q2：双呈阳性细胞

Q3：CD4单呈阳性细胞，为CD4 T细胞

Q4：双呈阴性细胞

3.细胞凋亡（Cell apoptosis）

拖进凋亡样本，双击鼠标原始记录开启图型对话框。X轴选择FSC-A，Y轴选择SSC-A。剖析凋亡的细胞选择图中所显示的细胞人群开展剖析。细胞残片不予以剖析。

在SSC/FSC图上双击鼠标“剖析的细胞人群”，X轴选择FITC,用于表明AnnexinV-FITC。Y轴选择PE-Texas,用于表明PI。用四分门设门专用工具定义活细胞和凋亡细胞。如下图所显示：

Q1：(AnnexinV-FITC)-/PI ，此地区的细胞为萎缩细胞。也有可能有极少数的末期凋亡细胞在这其中，乃至机械设备损害的细胞也包括在其中。

Q2: (AnnexinV FITC) /PI ，此地区的细胞为末期凋亡细胞。

Q3：(AnnexinV-FITC) /PI-，此地区的细胞为初期凋亡细胞。

Q4：(AnnexinV-FITC)-/PI-，此地区的细胞为活细胞。

一般统计分析细胞凋亡率时选用Q2 Q3，末期凋亡＋初期凋亡群（即全部AnnexinV呈阳性群）。

4.细胞周期时间（Cell Cycle）

细胞周期时间的检验是流式的细胞仪更为普遍的运用之一。细胞周期时间就是指以有丝分裂方法繁衍的细胞从等位基因瓦解完毕到子细胞瓦解完毕所亲身经历的全过程。一般由G1期、S期、G2期和M期构成。细胞在G1期进行必需的成长和化学物质提前准备，在S期进行性染色体DNA的拷贝，在G2期开展需要的定期检查修补，以确保DNA复制的精确性。在M期进行基因遗传到子细胞中的平等分派，使细胞开展瓦解。

细胞周期时间检测中PI更为常见。PI为插进性核苷酸荧光染料，能选择性的置入核苷酸DNA和RNA发夹结构螺旋式的碱基中间与之融合，其融合的量与DNA的成分成正比例关系，用流式的细胞仪开展剖析，就可以获得细胞周期时间每个环节的DNA遍布情况，进而估算出每个期的百分之成分。

以cell cycle 文件夹名称中的5206.001，PI标识为例子，设门选择总体目标细胞人群，将细胞残片清除在外面。即双击鼠标操作台中的5206.001样本，开启图型对话框。X轴选择FSC-H，Y轴选择SSC-H，细胞残片坐落于左下方的部位，设门选定总体目标细胞，如下图：

设门选定要开展细胞周期时间研究的单细胞人群，清除黏连细胞（黏连在一起的双细胞或多细胞低回声区等）的危害。X轴选择FL2-W(width)，Y轴选择FL2-A(area)，设门方法如下图：

BD的流式的仪收集的数据信息：在开展周期时间研究的情况下，一般是选用FL2-A与FL2-W（或是FL2-A与FL2H）开展设门。

Beckman的流式的仪收集的数据信息：X轴选择FL3-LIN,用于表明PI的线形数据信号。Y轴选择FL3-PEAK,用于表明PI的最高值数据信号。设门方法如下图：

在FlowJo操作台中选定“单细胞人群”这一连接点，在工具栏的“专用工具”中选择“细胞周期时间”，开启周期时间剖析对话框。获得G1期、S期、G2期细胞百分数，G1期CV值和G2期CV值等数据信息。

图上粉红色的曲线图是周期时间线性拟合的实体模型曲线图，灰黑色的为样本曲线图。理想化情况是粉红色和灰黑色曲线图符合一致为最好。线性拟合的优劣可以依据右侧的RMS值来分辨。RMS(root mean square error)值越低越好，当周期时间线性拟合的不太好的情况下，可以根据拆换拟合模型（Watson和Dean-Jett-Fox）或是变更限定标准保证（G1是G2的二倍）开展调节。

手机软件特点：

阶梯性设门

图象展现法

多种多样设门专用工具

强劲的批量处理作用

多种多样剖析服务平台及专用工具

莹光赔偿

灵便便捷的数据信息导出来